Креатинкиназа катализирует реакцию между креатинфосфатом и АДФ, в результате которой образуется креатин и АТФ. Образовавшийся АТФ, в присутствии глюкозы и гексокиназы (ГК), превращается в АДФ и глюкозо-6-фосфат. Образовавшийся глюкозо-6-фосфат в присутствии глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) вступает в реакцию с β-НАДФ+, образуя 6-фосфоглюконат и β-НАДФН. Наличие в реакционной смеси мышиных антител, подавляющих активность КК-MM, позволяет определить остаточную активность изоферментов КК-B (КК-MB и КК-BB). Активность КК-MB вычисляется путём умножения активности КК-B на два. Путём измерения изменения оптической плотности в результате превращения β-НАДФ+ в β-НАДФН за определённый промежуток времени при 340 нм можно вычислить остаточную активность в исследуемом образце.