ПЦР-диагностика инфекций в сперме (эякуляте)

ПЦР-анализ на сегодняшний день является одним из высокотехнологичных, доступных и эффективных методов молекулярной диагностики, применяемый в разных областях медицины. Чаще всего он используется для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний человека, в том числе инфекций, передаваемых половым путём (ИППП), и выявления возбудителей урогенитальных инфекций, которые могут вызывать различные воспалительные заболевания органов мочеполовой системы у мужчин и женщин.

В этой статье речь пойдет о методе ПЦР для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, при анализе спермы (эякулята). Какие инфекции можно определить в сперме, а какие нельзя? Какие еще материалы можно использовать для диагностики инфекций половой системы?

Среди преимуществ ПЦР как метода в сравнении с другими, традиционно используемыми для диагностики инфекционных заболеваний человека (иммуноферментный анализ, бактериологический посев, микроскопия), стоит отметить непосредственное обнаружение инфекционного агента в результате выявления специфического фрагмента ДНК или РНК возбудителя в исследуемом образце, а потому - возможность напрямую идентифицировать возбудителя инфекции, осуществлять раннюю диагностику, например, в инкубационном периоде, диагностировать заболевание не только в острой и хронической формах, но и выявлять скрытые (латентные) формы инфекций, протекающие без выраженных симптомов или бессимптомно, а также проводить скрининговые исследования, направленные как на определение уже имеющейся инфекционной патологии, так и выявление возможного носительства инфекций для оценки принадлежности пациента к группе риска.

Спектр возбудителей, выявляемых методом ПЦР, чрезвычайно широк, в связи с чем наибольшее распространение ПЦР-диагностика получила в гинекологической и урологической практике, в дерматовенерологии. Для диагностики большинства бактериальных и вирусных инфекций, выявления возбудителей ИППП, вызывающих заболевания, передаваемые половым путём (ЗППП), материалом для исследования служит, в основном, соскобное отделяемое слизистых оболочек мочеполовых органов: соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала и поверхности шейки матки у женщин, соскоб из уретры (мочеиспускательного канала), выделения из половых органов - у мужчин и женщин. При обследовании на некоторые виды инфекций (ВИЧ, гепатиты В и С, вирус Эпштейна-Барр и др.) для анализа берут кровь. Для выявления цитомегаловирусной и герпетической инфекций можно исследовать мочу. Клиническим материалом для ПЦР-диагностики ИППП у мужчин может служить секрет предстательной железы и эякулят (сперма). В каждом конкретном случае выбор исследуемого биоматериала определяется диагностической задачей исследования.

В данной статье мы подробнее остановимся на диагностике ИППП у мужчин и возможности выявления возбудителей ЗППП и урогенитальных инфекций в эякуляте.

Инфекционно-воспалительные заболевания органов мужской репродуктивной системы могут явиться одной из возможных причин снижения мужской фертильности (способности к воспроизведению потомства), а урогенитальные инфекции их вызывающие - быть ассоциированы с мужским бесплодием.

К органам мужской репродуктивной системы относятся наружные и внутренние половые органы. К числу наружных относят половой член и мошонку. Внутренние половые органы представлены яичками с их оболочками и придатками, расположенными в мошонке, семявыносящими протоками и добавочными половыми железами, в числе которых предстательная железа (простата) - железисто-мышечный орган, охватывающий мочеиспускательный канал ниже мочевого пузыря, семенные пузырьки - парный железистый орган, расположенный над предстательной железой, и бульбоуретральные (Куперовы) железы - парные округлые железы небольшой величины, расположенные между пучками мышц мочеполовой диафрагмы. В яичках, являющихся парной половой железой, происходит образование мужских половых клеток - сперматозоидов и выработка мужских половых гормонов. Продукты секреции добавочных половых желез образуют семенную жидкость (семенную плазму, или спермоплазму), которая при смешении со сперматозоидами образует сперму. Придаток яичка (эпидидимис) тесно связан с яичком и служит резервуаром накопления спермы и созревания сперматозоидов, являясь частью семявыводящих путей. Семявыносящий проток представляет собой парный трубчатый орган, служащий для транспортировки сперматозоидов из эпидидимиса в семявыбрасывающий проток. При эякуляции (семяизвержении) происходит сокращение продольных мышечных волокон семявыносящего протока, сперматозоиды поступают в семявыносящий проток и смываются содержимым семенных пузырьков в уретру. Вклад секрета семенных пузырьков и предстательной железы в общий объём семенной жидкости составляет около 95% (примерно 35% приходится на секрет предстательной железы, 60% - на секрет семенных пузырьков), поэтому колебания объёма эякулята, в первую очередь, зависят от секрета добавочных половых желез. Тесная функциональная взаимосвязь всех органов мужской половой системы позволяет оценивать её состояние путём исследования эякулята. Среди лабораторных методов исследования анализ эякулята является важнейшим и, зачастую, - достаточным не только для оценки мужской фертильности, например, при анализе спермограммы, но и диагностики наиболее распространённых, репродуктивно значимых урогенитальных инфекций.

Наиболее частыми возбудителями инфекций мужского урогенитального тракта являются бактерии: гонококк (Neisseria gonorrhoea) - возбудитель гонореи, хламидии (Chlamydia trachomatis) - возбудитель урогенитального хламидиоза, трахомы и венерической лимфогранулемы, бледная трепонема (Treponema pallidum) - возбудитель сифилиса, микоплазмы (Mycoplasma genitalium и Mycoplasma hominis) и уреаплазмы (Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum), являющиеся инфекционными агентами воспалительных процессов в мочеполовых органах, а также простейшие, например, трихомонада (Trichomonas vaginalis) - возбудитель урогенитального трихомониаза, грибы, например, рода Candida, вызывающие урогенитальный кандидоз, и различные вирусы, среди которых вирусы простого герпеса 1 и 2 типов (ВПГ, Herpes simplex virus, HSV1 и HSV2) - возбудители генитального герпеса, цитомегаловирус (CMV), вирус папилломы человека (ВПЧ, HPV, Human papillomavirus), вирусы гепатита В (HBV), гепатита С (HCV), ВИЧ (HIV) и другие. Некоторые из перечисленных бактериальных возбудителей (гонококк, хламидии, бледная трепонема, генитальная микоплазма) являются патогенами, другие (уреаплазмы, энтерококки, стафилококки и ряд других) - принадлежат к группе условно-патогенных микроорганизмов, способных вызывать воспаление в половых органах при снижении иммунной защиты.

Вирусы и бактерии могут напрямую поражать сперматозоиды, приводя к изменению их подвижности. Так, например, известно, что Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum, прикрепившиеся к головке и средней части сперматозоидов, негативно влияют не только на их подвижность, но и способность к оплодотворению яйцеклетки, проводимому в экспериментальных (in vitro) условиях. Повреждающее действие могут оказывать и продуцируемые микроорганизмами токсины. В ответ на инфекционный процесс развивается вторичное воспалительное повреждение, сопровождаемое образованием свободных радикалов и цитокинов, способных оказывать цитотоксическое воздействие на половые клетки. Кроме того, инфекции являются одним из факторов риска образования антиспермальных антител (АСАТ), направленных против различных частей сперматозоидов. Механизмом образования АСАТ на фоне воспалительного процесса является всё та же способность бактерий, вирусов и грибов прикрепляться к мембране сперматозоидов, вследствие чего происходит запуск аутоиммунных реакций. Присутствие АСАТ в эякуляте приводит к снижению его качественных и количественных характеристик: уменьшению концентрации и подвижности сперматозоидов, изменению морфологии половых клеток, их агглютинации, к изменению значений pH и вязкости семенной плазмы. Тем самым инфекции мочеполовых органов могут снижать репродуктивную функцию у мужчин.

Большинство возбудителей ИППП попадают в организм преимущественно половым путём. Наиболее часто инфекции выявляются у лиц молодого возраста, особенно тех, кто имеет большое число половых партнёров. При незащищенном половом акте высок риск заражения хламидиозом, гонореей, сифилисом, трихомониазом, гепатитами В и С, ВИЧ, герпесом, ВПЧ. Всего в настоящее время насчитывается более двадцати инфекций, которые передаются половым путём. Многие из них характеризуются высокой контагиозностью, а потому - быстрым распространением среди населения. К примеру, ежегодно в мире регистрируется около 90 миллионов новых случаев хламидийной инфекции, а восприимчивость к урогенитальному хламидиозу приближается к 100%. Следует помнить, что заражение ИППП может происходить при любом виде сексуальных контактов: анальном и оральном сексе, генитальном контакте без проникновения. Коварство этих инфекций заключается и в их возможности протекать без клинически выраженных симптомов. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), 50 - 80% населения инфицировано вирусом папилломы человека, но лишь 1 - 2% лиц имеют клинические проявления этой инфекции. Бессимптомное вирусоносительство играет ключевую роль в распространении генитального герпеса: до 70% случаев передачи этого вируса и заражения им здоровых лиц происходит при бессимптомном характере болезни и наличии вируса герпеса у больного. Скрытый характер течения инфекции затрудняет возможность её выявления. Отсутствие со стороны мужчины должного внимания на появление у себя некоторых из признаков или симптомов начинающегося заболевания, несвоевременное обращение к врачу или неадекватное лечение, например, в случае предпринимаемого самолечения, могут способствовать переходу инфекции в хроническу форму и развитию хронического заболевания. Хроническую инфекцию труднее диагностировать, тяжелее лечить, к тому же последствия хронического инфекционно-воспалительного процесса в мочеполовых органах оказываются более тяжкими для мужского здоровья.

В зависимости от локализации инфекционного процесса чаще всего у мужчин развиваются уретрит (воспаление мочеиспускательного канала), цистит (воспаление мочевого пузыря), простатит (воспаление предстательной железы), эпидидимит (воспаление придатка яичка) и орхит (воспаление яичка). Острый эпидидимит может распространиться и на яички (эпидидимоорхит). Симптомы или признаки заболевания напрямую зависят от того, какой именно возбудитель инфекции попал в мужской организм и каково состояние иммунитета в целом. Наиболее частыми возбудителями инфекций, вызывающих уретрит, являются Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoea, Mycoplasma genitalium и Ureaplasma urealyticum. Среди сексуально активных молодых мужчин эпидидимит чаще вызывается Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoea и Trichomonas vaginalis. У мужчин старшего возраста и пожилых чаще обнаруживают условно-патогенную микрофлору (Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и др.).

Симптомы урогенитальных заболеваний, вызываемых различными возбудителями ИППП, чаще всего не являются специфичными. При остром характере инфекционного-воспалительного процесса клиническая картина ИППП у мужчин может выражаться такими симптомами, как дискомфорт, зуд и жжение в области уретры, боль в промежности, нижней части живота и в области мошонки, болезненность при мочеиспускании (дизурия) и половых контактах (диспареуния), гиперемия и отёчность кожных покровов в области поражения, слизистые или гнойные выделения из уретры. В случае скрытой формы инфекции признаками заражения могут являться редкие, незначительные выделения из уретры. Сходство клинических проявлений многих урогенитальных инфекций вовсе не означает, что существует их одинаковое лечение, каждая инфекция требует индивидуальной медикаментозной терапии. Это диктует необходимость проведения лабораторного исследования, направленного на выявление и идентификацию возбудителей ИППП.

Одним из таких видов исследования, предлагаемых в нашей клинике для мужчин, является анализ эякулята с помощью молекулярно-биологического метода ПЦР. Исследование является скрининговым и представляет собой блок анализов ПЦР на инфекции в сперме. Предназначен для обнаружения в биоматериале специфических фрагментов ДНК основных возбудителей ИППП и урогенитальных инфекций мочеполового тракта у мужчин: Neisseria gonorrhoeae, Clamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и Ureaplasma spp. Обследование не требует применения каких-либо инвазивных процедур, а потому может быть выполнено в кратчайшие сроки. Использование для этих целей современного высокочувствительного и высокоточного диагностического метода, каким является ПЦР-анализ, представляется в настоящее время неотъемлемой частью комплексного подхода в лабораторной оценке мужского репродуктивного здоровья.

Другие статьи раздела

• 
  MAR-тест, спермограмма, мужское здоровье, бесплодие, АСАТ (антиспермальные антитела)
  MAR-тест (мар-тест) определяет процент сперматозоидов, связанных с антителами классов IgG и IgA (прямой MAR-тест) и титр антиспермальных антител (АСАТ) в биологических жидкостях (спермоплазма, слизь шейки матки, плазма крови) (непрямой MAR-тест). Тест является международно признанным стандартом диагностики АСАТ.
• 
  Анализ спермограммы: виды
  Если врач уже выдал Вам направление, и Вы готовы сдать спермограмму, то в этой статье мы расскажем про разновидности этого анализа. Что вообще такое анализ спермограммы, для чего он необходим, Вы можете прочитать в этой статье.
• 
  Анализы для ЭКО

  Анализы для ЭКО в лаборатории репродукции ЦИР

  В некоторых случаях бесплодия паре требуется проведение ЭКО – экстракорпорального оплодотворения или оплодотворения в пробирке. Перед ЭКО обязательно проводится обследование, в том числе, анализы и УЗИ. 

  Все необходимые анализы Вы можете сдать в нашей лаборатории ЦИР.

• 
  Антиспермальные антитела
  Что такое антиспермальные анитела (АСАТ), какие они бывают, какие методы диагностики АСАТ применяются в Лаборатории ЦИР.
• 
  Расшифровка спермограммы и норма спермограммы
  Нормы спермограммы Для расшифровки спермограммы необходимо опираться на референсные значения, в быту называемые нормы. Нормы спермограммы менялись с течением времени, в издании ВОЗ 1999 года мы видим одни цифры, а в издании 2010 года – совсем другие. Общая тенденция – снижение значений «нормального»...
• 
  Спермограмма - что это, когда назначают

  Спермограмма - в каких случаях, для чего она необходима, и как проводится это исследование